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水體環境中新興致病性微孢子蟲之風險監測及多樣性探討-以角膜條微孢蟲為模式

為了解決阿米一期fm的問題，作者陳榮盛 這樣論述：

微孢子蟲是一門可以感染人類、陸域與水域動物及昆蟲等生物的胞內寄生性真菌，目前已知的物種超過1500多種，其中會造成人類疾病的有16種，但近幾年陸續於臨床案例中發現許多新的品種會感染人類。人類微孢子蟲感染症主要的臨床案例為腹瀉微孢子蟲感染症，其次為眼疾微孢子蟲感染症。早期受到檢驗技術限制，微孢子蟲被認為只會感染免疫不全的病患，近年由於生物技術的發展，許多研究顯示微孢子蟲也會感染免疫功能正常的人，且群聚感染案例時有所聞。目前美國國家過敏症和傳染病研究所把微孢子蟲感染症定義為新興感染症，與A型肝炎病毒、沙門氏菌、李斯特菌、痢疾阿米巴原蟲與隱孢子蟲等列為同一項次，主要傳播途徑可能跟水傳播與食物傳播有

關，被認為需要加強檢測。目前針對微孢子蟲的環境調查研究，主要聚焦引起腹瀉症狀的腸上皮細胞微孢子蟲於水體環境中的存在情形，但相對其他病原體，環境微孢子蟲研究數量仍屬少數。近幾年眼疾微孢子蟲感染案例有日漸增加的趨勢，且許多研究均指出眼疾微孢子蟲感染與環境接觸有密切的關連性，例如台灣的眼疾微孢子蟲病患調查結果顯示，與溫泉活動具有統計上的顯著相關。綜觀所有水體環境中微孢子蟲或原蟲類病原體研究皆需進行大量水體濃縮，但大量水體濃縮耗時且成本昂貴，導致無法進行普遍性的調查。有鑑於此，本研究第一項主旨在於透過改善檢驗方式，提升環境檢測靈敏度，並實際利用環境水樣驗證方法的可行性。本研究首先針對近幾年常見眼疾微孢

子蟲的物種-角膜條微孢蟲進行小量水體採集檢驗方法學建立、全台溫泉調查與風險因子探討。其次進行全台水庫及河川等水環境的調查與分析，建立與擴充台灣環境角膜條微孢蟲基因序列資料庫。2017年台灣發生第一例泳池微孢子蟲角膜炎群聚感染事件，本研究於感染案例發生後，採集該泳池及周遭環境的樣本，進行感染朔源與微孢子蟲存在情形分析。此外，定量分析為近幾年病原體風險評估的重要參數之一，故本研究亦嘗試透過上述角膜條微孢蟲基因序列資料庫的建立，評估並測試可行的角膜條微孢蟲定量分析方法。本研究除了以角膜條微孢蟲為偵測目標，並針對其他人類感染相關微孢子蟲進行環境檢測方法建立。本研究建立角膜條微孢蟲的巢式PCR，偵測極限

結果顯示相較於一般角膜條微孢蟲或微孢子蟲的PCR，偵測極限提升4至5個次方數。本研究共收集全台各區溫泉水體樣本60個及重要之河川及水庫水體樣本50個。於溫泉研究結果顯示，有25%的水體呈現陽性反應，且其中有5個樣本檢測結果與已知角膜條微孢蟲序列相似度高達100%，且統計結果顯示微孢子蟲汙染與戶外環境有顯著相關，這兩項檢測結果，驗證了先前臨床研究推測溫泉活動與外在環境汙染是微孢子蟲眼疾感染的危險因子。據我們所知，本研究為第一個建立以小量水體樣本檢測水體環境中角膜條微孢蟲存在的方法。而於河川、水庫水體樣本的檢測結果顯示，高達94%呈現陽性反應，但僅39%的陽性樣本可與目前現有資料庫的參考序列具有9

7%以上的同源性。本次研究成果呈現台灣水環境中類角膜條微孢蟲的多樣性，透過親源演化分析結果顯示，主要可區分為腹瀉相關微孢子蟲集群、眼疾相關微孢子蟲集群、新型微孢子蟲集群及人畜共通疾病相關微孢子蟲集群。此外，本研究的類角膜條微孢蟲主要於微孢子蟲分類為第四系群，此系群一般認為多屬陸域微孢子蟲，且大多數人類感染相關微孢子蟲亦於此系群，本研究結果提供微孢子蟲為新興且具多樣性之病原體的證據。泳池微孢蟲角膜炎群聚感染事件的結果則顯示，泳池洗腳池為微孢子蟲汙染熱點，且其與泳池外沙地停車場的微孢子蟲於基因序列具有高度同源性，本研究推測感染途徑是經由人潮流動將受汙染的沙土帶入游泳池的換鞋區域，並造成洗腳池汙染，

導致泳池內設施有微孢子蟲存在，本次結果亦顯示微孢子蟲於環境中具有高度多樣性。最後，本研究建立了角膜條微孢蟲的定量PCR分析方法與其他微孢子蟲PCR檢測的方法，未來將持續針對水體環境中各類微孢子蟲進行檢測方法學之建立、並進行環境檢測與風險評估，以期望建立更完善的微孢子蟲環境流行病學，提供相關建議以提升用水安全與公共衛生之精進。